Анализ пцр на хламидии. Пцр на хламидии

34 541

Как известно, всякая болезнь имеет свои, присущие только ей, признаки. Но это не имеет никакого отношения к хламидиозу.
Хламидиоз – это болезнь, которая не имеет чётких симптомов, присущих только ей, а иногда и вовсе протекает бессимптомно. И даже если какие-то проявляются, то чаще всего они схожи с признаками других ЗППП.
Поэтому для постановки диагноза решающими являются лабораторные методы исследования. В отличие от многих других заболеваний диагноз хламидиоз – чисто лабораторный.

Кто, прежде всего, должен обследоваться на хламидиоз?

Мужчины и женщины, имеющие много половых партнеров, особенно случайных.
Лица, у половых партнёров которых обнаружен хламидиоз, даже при отсутствии жалоб и симптомов. Ведь осложнения хламидиоза могут развиваться даже при его бессимптомном течении. Риск заражения партнера составляет около 90%.
Женщины, страдающие бесплодием более 2 лет, даже в том случае, если половой партнёр обследован и здоров.
Женщины с эрозиями шейки матки, цервицитами, воспалением яичников (особенно при планировании беременности). Причем влагалищный мазок при этом может быть нормальный.
Женщины с нарушением протекания беременности: самопроизвольные выкидыши, преждевременные роды, многоводие, повышение температуры неясного происхождения во время настоящей беременности.

Что исследуют?
Для обнаружения хламидий необходимо произвести забор материала. Это может быть соскоб, содержащий клетки больного органа — влагалища, шейки матки, секрет простаты, соскоб из уретры, конъюнктивы глаза. Таким материалом также может быть кровь, моча и сперма у мужчин.

Какие анализы назначают при хламидиозе и насколько они могут быть полезны?
Сначала мы остановимся на возможных методах обследования, а затем сделаем вывод, какие из них наиболее предпочтительны.

2. Иммуноцитологический анализ — Реакция прямой иммунофлюоресценции (РИФ или ПИФ).
Этот метод предусматривает прямое выявление антигенов хламидий. Для этого материал, полученный при соскобе, обрабатывают специальными антителами, которые непосредственно обработаны флуоресцирующим веществом. Эти антитела связываются со специфическими антигенами хламидий. Затем при люминесцентной микроскопии хламидийные включения в клетках определяют по зелёному или желто-зеленому свечению.
Иммуноцитологический метод используется как при острой, так и при хронической фазе заболевания.
Существенным недостатком РИФ является большое количество ложноотрицательных и ложноположительных результатов. Ложноотрицательные результаты чаще всего связаны с нарушением правил забора биологического материала. Ложноположительные результаты могут быть следствием сочетанных инфекций урогенитального тракта, когда вместе с хламидией присутствует другая микробная флора. Кроме всего прочего, РИФ носит очень субъективный характер, т.к. зависит от опыта и личной оценки лаборанта. Поэтому РИФ дает очень высокий процент ложноположительных результатов и не может считаться достоверным. Недостатком РИФ также является то, что с её помощью нельзя оценить результаты лечения.
При урогенитальном хламидиозе точность метода составляет около 50%.

3. Иммуноферментный анализ (ИФА).
ИФА является методом непрямого выявления бактерий, т.е. возбудитель не обнаруживается непосредственно, а определяются специфические антитела (IgG, IgA, IgM) к нему. В основе метода лежит способность иммунной системы вырабатывать антитела (иммуноглобулины , Ig ) в ответ на внедрение чужеродных агентов.
Преимущества ИФА заключаются в том, что он позволяет не только выявить возбудителя заболевания, но также определить на какой стадии оно находится (острой или хронической) и оценить эффективность проведенного лечения. Преимуществом также является автоматизация метода и быстрота его проведения.

Как оценивают результаты?
При инфицировании хламидиями специфические антитела появляются на 5-20-й день заболевания. При этом появление каждого класса антител происходит на определённой стадии заболевания.

При первичном инфицировании сначала появляются IgМ, затем – IgA, и в последнюю очередь – IgG.
Самыми первыми после первичного инфицирования (через 5 дней) появляются IgM, которые защищают организм от возможного распространения инфекции. Они являются маркерами острой стадии заболевания. К 10-му дню количество IgM в крови достигает пика. Затем их уровень начинает снижаться, и появляются IgA. В течение небольшого периода времени могут обнаруживаться параллельно IgM и IgA антитела . Этот период свидетельствует о разгаре инфекционного процесса.
IgA можно обнаружить через 10 дней от момента появления первичных симптомов заболевания. Они защищают слизистые оболочки от проникновения бактерий глубоко в ткани. Высокий уровень IgA в выделениях слизистых оболочек говорит о хорошо функционирующем местном иммунитете.
Затем, через 15 — 20 дней после внедрения в организм Chlamydia trachomatis в крови появляются IgG, а уровень IgA снижается.
Острый первичный процесс характеризуется высоким уровнем (титром) IgM в сочетании с низким титром IgG.
При повторном заражении отмечается быстрое нарастание титра IgG и IgА и практически полное отсутствие IgM.
При хроническом течении выявляются специфические IgG и А, концентрации которых не изменяются на протяжении длительного времени.
При излечении через 1,5-2 месяца IgA и IgM в крови не обнаруживаются, а IgG могут сохраняться в течение нескольких лет, однако их уровень снижается в 4-6 раз.
Длительно обнаруживаемые IgG указывают на перенесённую хламидийную инфекцию.
При обострении хламидиоза количество IgA и IgG увеличивается в несколько раз.
Эффективность проведенного лечения определяется по наличию IgA. Если через 2 месяца после курса лечения в крови обнаруживаются IgA — это означает, что инфекция осталась.

Необходимо отметить, что специфические антитела , вырабатываемые к хламидиям, не обеспечивают стойкого иммунитета против них.
Точность этого анализа на хламидиоз составляет около 70 %. Это связано с тем, что антитела к хламидиям могут присутствовать и у здоровых людей вследствие ранее перенесенного заболевания, а также определяться при респираторных и других видах хламидийных инфекций.

4. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
С помощью ПЦР выявляется специфический участок или фрагмент ДНК хламидий в исследуемом материале, поэтому в сравнении с другими методами спутать хламидии с какой-то другой инфекцией невозможно. Он эффективен как в острой, так и в хронической фазе заболевания. При этом для анализа нужно совсем немного материала, результаты же готовы уже через 1-2 дня.
Для ПЦР исследования материалом может быть соскоб из уретры или цервикального канала, секрет предстательной железы, осадок мочи, соскоб с конъюнктивы глаз, кровь.
При диагностике первичного заражения более информативным является выявление данной инфекции в местах изначальной локализации, т.е. материалом должны быть соскобы из половых путей. Ложноположительные результаты ПЦР могут быть в случае нарушения процесса забора, транспортировки материала и проведения самого анализа.

Важно! Для оценки эффективности лечения ПЦР исследование нельзя проводить ранее чем через месяц после курса антибиотикотерапии, т.к. можно получить ложноположительные результаты. Это связано с тем, что при выявлении фрагмента ДНК хламидии невозможно оценить, насколько жизнеспособна сама микробная клетка. В этом случае жизнеспособность хламидий, а также связанная с ней возможность рецидивов болезни оценивается с помощью микробиологического метода. Если хламидия нежизнеспособна, то, несмотря на наличие фрагмента ДНК, микробные клетки не будут расти в клеточной культуре.
На сегодняшний день точность этого методы является самой высокой — до 100 %.
Данный метод рекомендован как предпочтительный в диагностике хламидийной инфекции.

5. Микробиологическое исследование (культуральный метод) с определением чувствительности к антибиотикам.
Суть этого метода состоит в том, что исследуемый материал высевается на специальную среду и выращивается. Затем по характеру роста и другим признакам идентифицируется возбудитель. Культуральный метод является наиболее чувствительным, он позволяет не только выявить жизнеспособные хламидии, но и подобрать антибиотик, к которому чувствителен данный микроорганизм.
Материалом для исследований может служить соскоб из уретры, шейки матки, секрет простаты, соскоб с конъюнктивы глаза.
За месяц до исследования нельзя применять антибиотики.
Микробиологическое исследование предпочтительнее проводить в следующих случаях:

Для оценки эффективности проведенного антибактериального лечения.
Для выявления чувствительности к антибактериальным препаратам.
Для выявления хламидий у лиц с иммунодефицитами (ВИЧ инфицированные, онкологические больные после лучевой и химиотерапии, лица, получающие иммунодепрессанты, др.).

Недостатками культурального метода диагностики хламидиоза являются трудоемкость, дороговизна и длительность исследования. Также необходимо особое оснащение лаборатории и очень высокая квалификация персонала. Кроме того, данный метод, как никакой другой, требует безукоризненного соблюдения правил при заборе материала, транспортировке и хранении.
Реальный срок получения результатов этим методом – не менее семи дней.
Выявляемость хламидий при посеве составляет до 90 %.

6. Экспресс-диагностика.
В основе всех методов экспресс-диагностики хламидиоза лежит ферментспецифическая реакция и иммунохроматография. Для этого используются специальные наборы для экспресс-диагностики, которые позволяют визуально оценивать результаты уже через 10-15 минут. Это очень быстрый и удобный метод, но его точность составляет всего 20-25 %.

Выводы.

Не существует ни одного метода, который бы в 100% случаев выявлял хламидии. Поэтому в большей части случаев лабораторная диагностика должна включать в себя сочетание не менее двух методов.
Самые чувствительные анализы на хламидиоз — ПЦР (ДНК — диагностика) и микробиологический анализ. Они являются «юридическим стандартом» при диагностике хламидиоза.
В случае первичного заражения до применения антибиотиков чаще всего достаточно одного ПЦР исследования.
При хронических процессах — ПЦР или микробиологический тест, или РИФ+ИФА.
При вероятности перехода возбудителя в L-форму – ИФА.
Для оценки эффективности лечения в идеале используется микробиологическое исследование. При невозможности его проведения – ПЦР + ИФА.
Для определения стадии болезни – ИФА.
У больных с иммунодефицитами ИФА не информативен, в идеале использовать микробиологический метод.
Не стоит особо полагаться на результаты по определению чувствительности хламидий к антибиотикам. Ведь, как известно, микроорганизмы ведут себя по-разному в пробирке (in vitro) и в живом организме(in vivo).

ПЦР-анализ – один из наиболее эффективных методик при диагностике хламидиоза. Это инфекционное заболевание тяжело поддается выявлению. Оно часто протекает бессимптомно, в иных случаях – симптомы недуга смазаны, имеют сходство с массой других патологий. Тем не менее, хламидиоз чреват тяжелыми осложнениями, которые могут проявиться через несколько лет после заражения. У мужчин часто выявляют простатит, у женщин – бесплодие, эрозию шейки матки и воспаление органов малого таза. По этой причине своевременная и точная диагностика хламидиоза крайне важна.

Что такое ПЦР-анализ, как проходит и в каких случаях назначается?

Материал для этого исследования может быть взят непосредственно из очага инфекции, при хламидийной инфекции к таковым относятся:

влагалище;
шейка матки;
уретра;
сперма;
секрет простаты.

Также для ПЦР-исследования может быть взята моча или кровь.

В ходе исследования выделяются участки ДНК и РНК искомых болезнетворных микроорганизмов, которые вступают в специфическую полимеразную реакцию, что вызывает их бурный рост и развитие, что и облегчает их обнаружение.

Это абсолютно безболезненная методика, которая не требует особой подготовки от пациентов. С другой стороны и от медиков она не требует значительных усилий: в течение двух-трех дней после забора анализов можно получить достоверную информацию о наличии или отсутствии микроорганизмов хламидия трахоматис у больного.

ПЦР способен выявить присутствие даже единичных хламидий в анализах. В ходе исследования создаются специальные условия для роста и развития ДНК хламидий в отобранном материале – это полимеразная реакция, цепной химический процесс дал название самому методу. Затем к пробе добавляются специальные аналитические маркеры, которые указывают на наличие либо отсутствие ДНК хламидий в образце.

В большинстве случаев данный способ исследования назначается:

во время беременности;
при обнаружении хламидиоза у полового партнера;
при бесплодии с не выявленной причиной;
при проявлении симптоматики хламидиоза.

Помимо хламидиоза ПЦР назначают при подозрении на следующие заболевания:

На сегодняшний момент практически всем беременным женщинам рекомендовано ПЦР исследование на хламидиоз. Почему так происходит? Хламидиоз – опасное заболевание, которое может передаваться от матери ребенку во время физиологических родов. В то же время хламидиоз протекает во многих случаях бессимптомно, по этой причине беременная может даже не подозревать о наличии у себя подобной инфекции.

Если в мазке беременной будет обнаружена хламидийная инфекция, женщине потребуется довольно длительное лечение, которое требует использование антибиотиков. Тем не менее, в арсенале современных докторов имеется достаточное количество эффективных и безопасных для матери и ребенка препаратов. О том, как сдавать ПЦР на хламидиоз во время вынашивания ребенка подробно расскажет доктор, который ведет беременность.

Несмотря на все неоспоримые достоинства этого метода, все же и у него имеется ряд существенных минусов:

Как подготовиться к анализу правильно и как расшифровать результаты анализов?

Данный вид исследования не требует особых мер подготовки, забор материала проходит быстро и безболезненно. Однако соблюдение несложных правил поможет получить достоверный результат анализа. Вот эти несложные меры подготовки к ПЦР-исследованию:

Если же для анализа требуется сдать кровь, следуйте таким правилам:

кровь на ПЦР сдают натощак: перед забором биологического материала нельзя есть, в том числе и жевать жевательную резинку, также нельзя пить даже воду;
за сутки до анализа желательно исключить из рациона жирную и жареную пищу;
также необходимо отказаться от приема любых лекарственных средств, разумеется, если таковые не являются жизненно важными.

Для анализа может потребоваться моча, ее собирают следующим способом:

Нарушение этих правил может привести к ложноотрицательному результату исследования, что в свою очередь усложнит назначение лечения и может привести к развитию осложнений.

Поставить правильный диагноз и назначить адекватное лечение при хламидиозе сможет только профессиональный доктор, однако понять в общих чертах результаты анализа может человек без медицинского образования. Частные клиники в большинстве случаев не дают комментарии по обнаруженным показателям.

«Отрицательный» результат говорит об отсутствии искомого микроорганизма в предоставленном материале для исследования. Однако ПЦР анализ – не истина в последней инстанции. Если у пациента присутствуют явные признаки хламидиоза при «чистых» анализах, это повод для повторного обследования с подключением других методов.

«Положительный» ответ говорит о наличии того или иного возбудителя в предоставленной пробе. Однако и это не всегда подтверждает наличие инфекционного процесса. ПЦР анализ дает качественное отображение состава микрофлоры, что может быть неверно истолковано.

Так, например, некоторые бактерии и прочие микроорганизмы могут в небольшом количестве постоянно присутствовать в микрофлоре влагалища, не вызывая при этом воспаления. Развитие заболевания может вызвать резкое увеличение количества этих микроорганизмов. То есть значение имеет не только наличие тех или иных микроорганизмов, но и их количество.

Хламидиоз – заболевание, которое трудно диагностировать, еще сложнее вылечить. Для выявления недуга необходимо подключение самых современных и эффективных методов, к которым относится ПЦР диагностика.

Содержание

Серьезная инфекция, чаще передающаяся половым путем, опасна тяжелыми последствиями. Лабораторные методы диагностики – анализы крови на хламидии – помогают выявить заболевание, приступить к его лечению. Какие особенности имеют обследования, насколько информативны все их разновидности, как происходит расшифровка результатов – вопросы, на которые интересно получить ответы.

Chlamydia trachomatis – что это

при незащищенном половом акте;
бытовым путем;
при беременности от инфицированной матери ребенку;

для мужчин болезнь опасна развитием простатита, импотенции, хламидийной пневмонии;
у женщин хламидии провоцируют выкидыши, спайки в малом тазу, преждевременные роды, опухоли матки.

Диагностика хламидиоза

Заболевание длительный период после заражения может быть бессимптомным. Часто хламидиоз выявляется при диагностике других половых инфекций. Из-за особенностей биологического цикла возбудителя анализы проводят несколькими способами. Лабораторная диагностика хламидиоза включает методы исследования:

первичный микроскопический анализ мазка;
культуральный способ – посев биоматериала в специальную среду – дает точный результат;
РИФ хламидиоза – определение реакции иммунофлюоресценции – возбудители светятся под микроскопом, отличается достоверностью.

Анализ на хламидии

Самую точную диагностику по выявлению хламидийной инфекции имеют анализы крови. Производят их по нескольким методикам, имеющим свои особенности. Основные виды обследования:

Иммуноферментный анализ – ИФА. По количеству антител Igg, Igm, Iga определяется, какая фаза в данный момент наблюдается у заболевания – острая, хроническая или ремиссия.
Полимерно цепная реакция – ПЦР. Обнаруживает ДНК возбудителя, является очень надежным методом диагностики.

осуществившим незащищенный секс с новым половым партнером;
женщинам, имеющим частые недомогания вследствие заболеваний малого таза;
обоим партнерам при планировании беременности, чтобы не заразить ожидаемого малыша;
женщинам, имеющим проблемы вынашивания ребенка;
пациентам с невыясненными причинами бесплодия.

Кровь на хламидии забирается из вены. Для получения объективных результатов врачи рекомендуют соблюсти требования:

делать анализы не ранее месяца после лечения антибиотиками;
не иметь половых контактов в ближайшие суток до момента обследования;
не курить за полчаса до забора крови;
приходить на исследование на голодный желудок;
за день не употреблять алкоголь;
не пить воду перед проведением анализов;
исключить выполнение физиопроцедур.

ПЦР на хламидии

При этом методе исследования хламидиоз в крови определяется по количеству ДНК микроорганизмов, которые находятся в отобранном образце. Анализ полимерной цепной реакции – ПЦР – отличается очень высокой точностью и чувствительностью. Результат получается быстрый и достоверный. Его считают положительным при большом количестве хламидий в пробе для исследования – подтверждается причина инфицирования. Преимущество метода – при его помощи выявляются инфекции:

в скрытой форме;
малосимптомные;
при острой стадии.

Большую опасность хламидиоз представляет для женщины, ожидающей рождения малыша. Велика вероятность внутриутробного заражения. Вовремя проведенная диагностика поможет начать лечение на ранней стадии, избежать серьезных проблем. Анализ ПЦР хламидии назначают гинекологи для исключения инфицирования, когда у беременной наблюдаются симптомы:

повышенная температура;
болезненность внизу живота;
плохое самочувствие.

Анализа крови ПЦР является универсальным. С его помощью определяется не только возбудитель хламидиоза, но и других инфекций – герпеса, туберкулеза, гепатита. При расшифровке возможны два варианта результатов:

отрицательный – свидетельствует об отсутствии заражения организма;
положительный – показывает, что инфицирование произошло, и каким видом бактерий.

ИФА на хламидии

С первых дней инфицирования организм начинает продуцировать антитела к хламидиям в крови. На защиту от болезни встают три вида иммуноглобулинов, которые называются Igg, Igm, Iga. Иммуноферментный анализ – ИФА на хламидиоз не только точно определяет их наличие, но констатирует стадию, в которой находится заболевание. Это связано с появлением каждого из антител на конкретном этапе инфицирования.

При исследовании крови методом ИФА иммуноглобулины выявляются в такие сроки:

после заражения сразу появляется Igm, если два других отсутствуют – диагностируют острое воспаление, важен при обследовании новорожденных;
через месяц после инфицирования образуются антитела Iga, которые говорят о прогрессировании болезни;
появление Igg сигнализирует о переходе хламидийной инфекции в ее хроническую форму.

Расшифровка анализа на хламидии

Интерпретация результатов обследования имеет тонкости, поэтому должна проводиться квалифицированными специалистами. Анализ крови на хламидии ИФА расшифровывается по каждому виду иммуноглобулинов, говорит о периоде развития инфекции. При определении Igm результаты таковы:

Положительный: со времени заражения прошло менее, чем две недели; если не обнаружены другие антитела, при наличии Igg, – обострение хронического воспаления.
Отрицательный: хламидиоза нет – при отсутствии всех иммуноглобулинов; когда определяется Igg – заражение произошло не менее двух месяцев назад.

При анализах крови на наличие антител Iga результат трактуется так:

Положительный: острая стадия хронический инфекции или при заражении, с момента которого прошло более двух недель; инфицирование ребенка при беременности.
Отрицательный: хламидийное воспаление отсутствует; со времени заболевания менее 14 дней; невелика вероятность заражения плода.

При расшифровке теста на Igg выдаются такие результаты:

При норме – отсутствуют, значение коэффициента позитивности в границах 0–0,99;
Положительный: заболевание хламидиозом или его обострение произошло более трех недель назад.
Отрицательный – в случае одновременного отсутствия иммуноглобулинов Iga Igm: хламидий в крови нет; полное выздоровление.

Где сдать анализы на хламидиоз

Тем, кто почувствовал признаки заболевания, имел незащищенный секс со случайным партнером, можно приобрести в аптеке экспресс-тест. С его помощью быстро определяется наличие заражения хламидиозом. Для анализа нужна моча или мазок у женщин. В инструкции описан метод их забора. Результат расшифровывается так:

положительный – требует немедленного обращения к венерологу для назначения лечения лекарствами;
отрицательная проба свидетельствует, что заболевание в момент проведения теста отсутствует.

Сдать анализы на хламидиоз можно по направлению врача- венеролога или гинеколога. Не исключено самостоятельно обращение пациента в медицинские учреждения при подозрении на инфицирование. Анализ крови на хламидиоз проводят такие организации:

женские консультации;
клиники планирования семьи;
кожно-венерологические диспансеры;
специализированные лаборатории для проведения исследований.

Сколько стоит анализ на хламидиоз

Сделать анализы на хламидии можно в клиниках или специализированных центрах, оказывающих такие услуги. Стоимость находится в зависимости от статуса учреждения, имеющегося оборудования. Играет роль классификация специалистов, занимающихся расшифровкой результатов. Цена анализа на хламидии в медицинских организациях Москвы сведена в таблицу:

Видео: как сдавать анализ крови на хламидии

Внимание! Информация, представленная в статье, носит ознакомительный характер. Материалы статьи не призывают к самостоятельному лечению. Только квалифицированный врач может поставить диагноз и дать рекомендации по лечению, исходя из индивидуальных особенностей конкретного пациента.

Нашли в тексте ошибку? Выделите её, нажмите Ctrl + Enter и мы всё исправим!

Анализ на хламидии у женщин изучается методикой ПЦР, выявляя с высокой точностью наличие и концентрацию вредоносных бактерий в организме на основе ДНК исследований клеток биоматериала.

Анализ на хламидии у женщин является важным исследованием . Ведь хламидийная инфекция – это не просто болезнь, передающаяся посредством половой близости, но и такое коварное заболевание, способное без особых проявлений симптоматики стать причиной развития первичного бесплодия либо привычного невынашивания плода.

Исследования, проводимые методикой ПЦР, делают с целью диагностирования инфекций, провоцирующих следующие вирусы, как микоплазма, уреаплазма, хламидии и прочие. Для обследования наличия хламидиоза и прочих инфекционных заболеваний, нужно сдавать кровь на анализы, мазки на бактериологический посев либо соскоб.

Если сдать мазок на посев либо соскоб, то хламидиоз, как наиболее коварное заболевание, передающееся при половых контактах, может не обнаружиться. Ведь атипичные бактерии, как хламидии, размножаются и концентрируются внутри иных клеток организма. Именно потому, такое заболевание, как хламидиоз (и уреаплазма), практически не идентифицируется при исследованиях в рамках привычных анализов.

Период инкубационного развития хламидий до определения выраженной симптоматики длится до 3-х недель. Именно за это время инфекция успевает встроиться в клетку организма, как у мужчин, так и у женщин. Диагностика ПЦР позволяет раньше выявить вирус и не дать распространится такому возбудителю, как уреаплазма.

Когда организм уже захвачен болезнью, проявляется следующая симптоматика у мужчин:

это моча мутного цвета;
утренние выделения из мочеиспускательного канала;
зуд и признаки жжения при мочеиспускании;
общее состояние слабости с повышением температуры тела;
выделения с кровянистыми примесями при мочеиспускании и даже наблюдается такое, как кровянистое семяизвержение.

Признаки заболевания хламидиозом у женщин это:

присутствие неприятного запаха гениталий;
желтоватые выделения слизистого состава из влагалища;
зуд и неприятное жжение в процессе мочеиспускания;
слабость самочувствия с незначительным повышением температуры.

Такие возбудители инфекций, как хламидии и уреаплазма, являются опасными, поскольку могут выказывать слабую симптоматику для обнаружения, а со временем исчезать. Запущенная форма деятельности в организме возбудителей, как хламидии и уреаплазма, приводит к поражению внутренних органов, как у мужчин, так и у женщин.

Анализ на хламидии – методики выявления хламидиоза для мужчин и женщиин

Диагностировать хламидиоз допустимо с использованием лабораторного метода исследований, где берут биоматериал для работ. Существует ряд методик выявления возбудителей типа хламидий и уреаплазма:

(это генетически-биологическое исследование методов полимеразной цепной реакции) выявляет со 100% точностью вредоносные тела в биоматериале типа ареаплазма, хламидии и прочие.
Бактериологическое культуральное обследование, это где берут материал на посев для выращивания, обнаружения и идентификации бактерий (хламидии, уреаплазма и прочих) в специальной питательной среде.
ИФА (это иммуноферментный анализ) нужно сдавать, чтобы выявить антитела к идентифицированному возбудителю.
РИФ (иммунофлуоресцентная микроскопия) – анализ, который нужно сдать, дабы основательно выявить хламидии.

Возбудитель мочеполового хламидиоза – Chlamidia trachomatis - микроорганизм, способный размножаться только внутри клетки (чаще всего клетки эпителия мочеполовых органов). Хламидиоз часто характеризуется скрытым и бессимптомным течением, чем и обусловлена частота возникающих на его фоне осложнений.

Долгое время, до создания метода амплификации нуклеиновых кислот, диагностика хламидиоза была затруднена, так как при обычном микроскопическом исследовании возбудитель не виден. Была попытка внедрения цитологического метода с окраской мазка по Романовскому-Гимзе и выявлением специфических внутриклеточных включений.

Но такой метод требовал значительных затрат экономических ресурсов, времени, наличия опытного квалифицированного лаборанта. И это все при низкой информативности данного метода - порядка 10%.

Показать всё

1. Введение

Более подробно о хламидиях трахоматис (Chlamydia trachomatis) и путях заражения можно узнать в этой статье (). А здесь мы подробнее остановимся на методах диагностики мочеполового хламидиоза и расшифровке возможных результатов анализов.

Самой первой серологической пробой, внедренной для подтверждения диагноза "урогенитальный хламидиоз", была реакция связывания комплемента (сокращенно РСК). Проба быстро утратила свою актуальность из-за высокой частоты ложноположительных результатов.

На протяжении двух десятков лет одним из самых информативных способов диагностики урогенитального хламидиоза считался метод прямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител. На фоне вышеперечисленных методов он отличался несколько более высокими показателями специфичности и чувствительности. Вместе с тем, метод требовал обеспечения лаборатории дорогостоящим оборудованием и реагентами.

Еще один метод, актуальный и по сей день, – выявление хламидий в культуре клеток. Этот метод будет описан ниже.

Так или иначе, сейчас повсеместно распространен другой анализ на хламидии - исследование отделяемого или соскоба из уретры, влагалища или цервикального канала методом ПЦР.

1 ПЦР-диагностика. Федеральными и Европейскими клиническими протоколами для диагностики урогенитального хламидиоза рекомендован метод амплификации ДНК. В отношении первичного выявления инфекции его специфичность равна 100%, чувствительность 98-100% (уровень доказательности А, уровень обоснованности I).
2 NASBA (метод амплификации РНК).
3 Выделение хламидий в культуре клеток.
4 Цитологический метод. Этот метод исследования мазка малоинформативен при диагностике мочеполового хламидиоза (специфичность 10-12%): есть небольшая вероятность обнаружения внутриклеточных включений – так называемых телец Гальбершетдера-Провачека. Помимо этого, при микроскопии проводится подсчет числа лейкоцитов (увеличение их количества - доказательство воспалительного процесса), а также исследование флоры и обнаружение дрожжеподобных грибков.
5 Серологические тесты.
6 Последние три метода (3,4,5) могут применяться только в определенных ситуациях, когда недоступны методы амплификации ДНК и РНК (ПЦР и NASBA).

Анализы на хламидии назначаются:

1 Скрининг половых инфекций при беременности и предгравидарная подготовка.
2 Желательно ежегодно сдавать анализы женщинам и мужчинам в возрасте до 25 -30 лет, а также лицам, не имеющим постоянных партнеров на протяжении последнего года или недавно сменившим партнера.
3 Лицам, имеющим симптомы уретрита, вагинита, цервицита.
4 Женщинам с ВЗОМТ (сальпингоофорит, эндометрит и так далее).
5 При обнаружении у пациента любой другой половой инфекции.
6 Мужчинам молодого возраста с воспалением придатков яичка и орхитом.
7 При подготовке к внутриматочному вмешательству.
8 При пневмонии и гнойном конъюнктивите у новорожденного.

2. ПЦР на Chlamydia trachomatis

Суть метода ПЦР - обнаружение генетического материала (ДНК) в исследуемом образце и его достраивание путем добавления «строительного» материала (дезоксинуклеорибофосфатов). В результате цепь ДНК удлиняется, ее обнаружение становится возможным с помощью электрофореза и/или флюоресценции.

Все манипуляции выполняются в специальном приборе – амплификаторе, который самостоятельно контролирует смену температур и протекающих фаз соответственно числу необходимых циклов амплификации.

ПЦР позволяет обнаружить хламидии уже через 3 дня после заражения, при высоком риске исследование повторяют через 2 недели после предполагаемого инфицирования.

В настоящее время набирает большую популярность . С его помощью исследуется и качественная, и количественная характеристика влагалищной микрофлоры.

ПЦР в режиме реального времени характеризуется короткими сроками выполнения, высокой специфичностью и чувствительностью (порядка 88-90%).

Но для подтверждения урогенитального хламидиоза ряд авторов рекомендуют использовать монокомпонентные наборы для ПЦР из-за более высокой их чувствительности (100%) в отношении хламидий трахоматис.

Совет этот актуален в ситуации, когда врач подозревает наличие хламидийной инфекции у пациентки, и исследование проводится для верификации диагноза. При отсутствии специфических симптомов у женщины более целесообразно проведение комплексной ПЦР (уровень обоснованности II).

3. Амплификация РНК хламидий (NASBA)

Это относительно новый для России, но более информативный молекулярно-биологический метод. Суть его заключается в обнаружении в материале (мазке, соскобе, моче и так далее) цепей РНК, наличие которых сопровождает процесс построения и жизнедеятельности клетки хламидии.

РНК является транспортировщиком генетической информации от ДНК и строителем клеточных структур возбудителя путем синтеза белка.

Именно по наличию РНК в положительных результатах NASBA можно судить об эффективности проводимой антибактериальной терапии: оценивается жизнеспособность хламидий. ПЦР, основанная на обнаружении только ДНК, такой возможности не имеет.

NASBA может применяться для контроля излеченности в более ранние сроки по сравнению с ПЦР. Для контроля эффективности лечения данный метод актуален по прошествии всего 14 дней после последнего приема антибиотиков.

4. Как правильно сдавать анализ на хламидии женщинам?

Женщины анализ на хламидии методами ПЦР или NASBA могут сдать у врача-гинеколога, дерматовенеролога.

Материалами для исследования у женщин обычно служат:

Соскоб из уретры, влагалища, цервикального канала вне менструации. Условием является наличие в забранном материале клеток эпителия. При взятии обычного мазка, слизистого отделяемого, гноя и тому подобного, результат может быть не информативным.

Соскоб на анализ у женщин берут из наружного отверстия уретры, цервикального канала и заднего свода влагалища.

1 При использовании универсального зонда: после взятия материала рабочая часть зонда отламывается и погружается в пробирку «Эппендорф» с консервирующим раствором.
2 При использовании ложечки Фолькмана: ее ополаскивают в пробирке с консервирующим раствором. После этого емкость плотно закрывают, а инструмент дезинфицируют и стерилизуют.

Первая порция свободно выпущенной мочи. Именно в первой порции мочи сосредоточено максимальное количество слущенных эпителиальных клеток урогенитального тракта. У женщин первая порция свободно выпущенной мочи менее информативна (чувствительность 80-90%), поэтому применяется намного реже, чем соскоб. При этом нет доказательств, что утренняя моча более диагностически значима, чем, например, дневная (уровень обоснованности II).

Моча собирается пациенткой самостоятельно в чистый стерильный сухой контейнер. Для исследования достаточно порядка 10 мл мочи. Рекомендуемый период хранения - 24 часа при соблюдении необходимого уровня температур (+2С…+8С).

5. Особенности забора материала у мужчин

Мужчины сдать анализы на хламидии могут у врача-уролога, врача-дерматовенеролога, врача-репродуктолога, андролога.

Материалами для исследования у мужчин обычно служат:

Отделяемое из уретры, соскоб из уретры. Подготовка пациента: перед забором материала не мочиться 2-3 часа, при обильных выделениях - 15-30 минут. При наличии обильных патологических выделений (например, гноя) рекомендуется удалить их ватным тампоном.

Процедура взятия соскоба для мужчин достаточно неприятна, порой болезненна. Соскоб забирается универсальным зондом из наружного отверстия уретры. После забора рабочая часть зонда отламывается и погружается в пробирку «Эппендорф» с консервирующей жидкостью.

Первая порция свободно выпущенной мочи (чувствительность выше, чем у женщин - 85-95%).
По показаниям для анализа на хламидии у мужчин может забираться секрет предстательной железы (при бесплодии, простатите и др. заболеваниях). Подготовка включает половое воздержание в течение 2 дней. Секрет простаты берет квалифицированный специалист после массажа предстательной железы. Головку полового члена необходимо очистить стерильным ватным тампоном.

После завершения массажа выделившийся сок предстательной железы в количестве 0,5-1 мл собирают в сухую пробирку «Эппендорф» и плотно закрывают. При отсутствии секрета - собирают первую порцию мочи (в ней и будет содержаться весь секрет) по аналогии с обычной вышеописанной техникой.

Максимальный срок хранения всех вышеперечисленных материалов – 24 часа при строгом соблюдении температурного режима в диапазоне +2С…+8С.

Доставляется материал в специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами. Для долгосрочного хранения взятый материал необходимо заморозить на срок не более 1 месяца при температуре -20С. Допускается только однократное размораживание материала.

6. Расшифровка результатов ПЦР и NASBA

1 Как правило, результаты ПЦР и NASBA доступны уже через 24-36 часов, в частных лабораториях сроки готовности результатов удлинены.
2 Результат может быть "положительный" (хламидии обнаружены, то есть у пациента хламидиоз) и "отрицательный" (хламидии не обнаружены, то есть у пациента мочеполового хламидиоза нет или получен ложноотрицательный результат).

При использовании методов амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) для грамотной интерпретации результатов необходимо соблюдать некоторые условия:

1 Контрольное исследование для оценки эффективности терапии назначается не ранее, чем через 1-1,5 месяцев после окончания приема препаратов (для ПЦР), и не ранее, чем через 14 дней для NASBA. Метод ПЦР не подразумевает определение жизнеспособности обнаруженных микроорганизмов, поэтому необходимо выждать полный цикл смены эпителия.
2 При сборе первой порции мочи после последнего акта мочеиспускания необходим перерыв не менее 3 часов. При обильных патологических выделениях из уретры мочу собирают через 15-20 минут после последнего акта мочеиспускания.
3 Существует мнение, что изменения гормонального фона приводят к появлению в исследуемом материале ингибиторов амплификации (слизь, кровь, гной и другие компоненты). Данная ситуация наиболее актуальна в период беременности, у женщин.

Предлагалось множество способов устранения данной проблемы, но пока ни один из них не является общепризнанным:

1 Ситуация с ингибиторами амплификации актуальна для небеременных женщин на 3 неделе после менструации.
2 При заборе материала в первые дни после менструации есть вероятность ложноотрицательного результата за счет недостаточного накопления возбудителя в эпителии. Таким образом, оптимальный период для взятия соскоба – 4 неделя после менструации.
3 Нет никакой необходимости в специальной подготовке пациентки (например, введения каких-либо препаратов, соблюдения определенной диеты) перед исследованием. На результат это не повлияет.
4 Существует проблема так называемого конкурентного ингибирования. Подобная ситуация возникает при использовании лабораторией наборов для ПЦР-диагностики нескольких видов микроорганизмов. При значительном преобладании в образце какого-либо одного вида возбудителя последний может "замаскировать" наличие других видов микроорганизмов. Результат будет ложноотрицательный.
5 При подозрении на ложноположительный результат возникает необходимость повторного исследования. Эта ситуация актуальна при бессимптомном течении инфекции с низкой бактериальной нагрузкой. В этом случае возможно исследование того же образца, либо забор нового, а также применение другого теста или даже метода исследования (класс рекомендаций В, уровень обоснованности II). При выявлении большого количества хламидий в исходном материале повторное исследование будет лишним и экономически необоснованным.

7. Иммуноферментный анализ

Согласно последним Федеральным рекомендациям, иммуноферментный анализ (ИФА) не применяется для диагностики неосложненного урогенитального хламидиоза (цервицитов, уретритов и др.). Такое «недоверие» обусловлено тем, что ИФА больше актуален для тяжелых, глубоких поражений хламидиями C. Trachomatis.

Метод ИФА основан на обнаружении в крови специфических антител, вырабатываемых в ответ на антигены хламидий. По сочетанию трех классов иммуноглобулинов в крови пациента можно судить о тяжести и длительности инфекционного процесса.

Как уже было сказано, данный метод при выявлении урогенитального хламидиоза имеет ряд недостатков:

1 Не информативен в диагностике восходящей инфекции, цервицита и уретрита.
2 Высокая частота перекрестных реакций.
3 Высока частота ложноположительных реакций.
4 Не подходит для контроля излеченности после проведенной антибактериальной терапии, так как неизвестно время существования в крови специфических антител;
5 Позволяет диагностировать преимущественно глубокие поражения, например, врожденный хламидиоз у новорожденных (класс рекомендаций А, уровень обоснованности I).

Для проведения ИФА используется венозная кровь пациента, взятая натощак. В защиту данного метода можно отметить:

1 Его более низкую стоимость, по сравнению с ПЦР.
2 Удовлетворительная специфичность порядка 90%.
3 Быстрота выполнения.
4 Простота забора и хранения материала.

8. Выявление хламидий в культуре клеток (на среде McCoy)

Этот метод уникален тем, что позволяет оценить не только качество проведенной терапии, но и определить чувствительность хламидий к различным группам антибактериальных препаратов.

Суть метода состоит в заражении обработанной культуры клеток забранным материалом с последующим посевом на питательную среду и инкубированием в течение двух суток. Наличие хламидий в полученных клетках определяется методом ПЦР.

Для определения чувствительности к антибиотикам в обработанную культуру клеток вносят ростовую среду с содержанием определенного антибактериального средства и инкубируют в течение 5 суток.

Эффективность препарата определяют по отсутствию или замедлению роста в определенных группах. Наличие роста свидетельствует о резистентности к добавленному в питательную среду антибиотику.

Недостатки этого метода диагностики - длительность (7 дней) и дороговизна, поэтому в клинической практике он используется в крайне редко. Обычно показанием для его назначения служит длительная неэффективная антибактериальная терапия.

9. Экспресс-методы

За рубежом в качестве рутинных, недорогих методов выявления хламидийной инфекции используются модифицированные серологические тесты.

9.1. Тест-система Chlamidia-antigen ELISA medac

Тест-система работает по принципу твердофазного ИФА-анализа. Готовая тест-система покрыта полученными путем генной инженерии, готовыми специфическими антителами. Данные антитела связаны со специальным ферментным комплексом.

При связывании антигенов с антителами ферменты высвобождаются, появляется желто-зеленое свечение, интенсивность которого и учитывает спектрофотометр.

В отличие от распространенного ИФА, где материалом для исследования служит кровь, при использовании данной тест-системы субстратом служат мазок или соскоб, взятые у женщины, мужчины. Чувствительность этого метода - около 65-70%, а специфичность 90-100%.

9.2. РИФ

В основе реакции иммунофлюоресценции (РИФ) лежит прямое связывание антигенов с мечеными антителами, дающими зеленое свечение. Хламидийные тельца подсвечиваются внутри клетки. Результат оценивается при люминисцентной микроскопии.

Чувствительность данного метода - около 50%, что связано с высокой частотой ложных результатов. Это обусловлено и субъективным восприятием результата (исследование проводит лаборант), и высокой вероятностью перекрестных реакций, и нарушением техники забора биологического материала. С помощью данного метода невозможно оценить эффективность проведенного лечения.

На фоне всех недостатков главными плюсами РИФ остаются низкая стоимость, простота выполнения и короткие сроки получения результата. Именно поэтому РИФ еще используют в некоторых странах в качестве рутинного исследования на мочеполовой хламидиоз.